1)要留心避免出現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過(guò)氧化物的活性,因而,在以HRP為符號(hào)酶的ELISA試劑盒測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很簡(jiǎn)單在溫育進(jìn)程中吸附于固相,然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。
2)樣本的搜集及血清別離中要留心盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的成長(zhǎng),其所分泌的一些酶或許會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)作分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測(cè)定辦法發(fā)作非特異性煩擾。
3)血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作別離,則可以在2~8℃下保存一周,ELISA試劑盒如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。
4)冰凍保存的血清標(biāo)本須留心避免因停電等構(gòu)成的重復(fù)凍融。ELISA試劑盒標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)作的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)作損壞作用,然后引起假陰性成果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留心,不要進(jìn)行劇烈振動(dòng),重復(fù)倒置混勻即可。
5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉積后取上清檢測(cè)。Elisa實(shí)驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)確診辦法。由于其試劑安穩(wěn)、易保存,操作簡(jiǎn)潔,成果判別較客觀等要素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)查驗(yàn)的各領(lǐng)域中。