細(xì)胞培育技能又叫細(xì)胞克隆技能。細(xì)胞培育技能指的是細(xì)胞在體外條件下的成長,在培育的進(jìn)程中細(xì)胞不再構(gòu)成安排(動(dòng)物),今天的文章中跟我們介紹一些關(guān)于細(xì)胞培育的基礎(chǔ)知識(shí)!
一、細(xì)胞培育的基本概念
體外培育(in vitro culture)包括所有結(jié)構(gòu)層次的培育,即:安排培育(tissue culture)、細(xì)胞培育(cell culture)和器官培育(organ culture)。
細(xì)胞培育(Cell culture)指從生物機(jī)體取出部分安排渙散成單個(gè)細(xì)胞或直接從機(jī)體取出單個(gè)細(xì)胞,也可把體外培育細(xì)胞渙散成單個(gè)細(xì)胞在體外條件下培育,細(xì)胞能繼續(xù)存活與增殖。
二、細(xì)胞培育意圖與用處
1、科學(xué)研討
(1)藥物研討開發(fā),如新藥挑選,疫苗、基因工程藥物、細(xì)胞工程藥物研討與開發(fā)、單克隆抗體制備等。
(2)基礎(chǔ)研討,如藥物效果機(jī)理、基因功能、疾病產(chǎn)生機(jī)理等研討。
2、生物制藥
(1)疫苗出產(chǎn):如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等),多肽疫苗(腫瘤疫苗)等。
(2)基因工程藥物出產(chǎn):如EPO等。
(3)抗體藥物、基因治療藥物出產(chǎn)。
(4)細(xì)胞工程藥物出產(chǎn):生物細(xì)胞內(nèi)的一些生物活性多肽,生物活性物質(zhì)等。
(5)使用細(xì)胞法體外測定生物活性物質(zhì)的活性;并預(yù)測其在體內(nèi)的藥效和代替體內(nèi)法檢測其成品的生物活性。
三 、原代培育和傳代培育
原代培育(primary culture):將動(dòng)物機(jī)體的各種安排從機(jī)體中取出,經(jīng)各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機(jī)械辦法處理,渙散成單細(xì)胞,置適宜的培育基中培育,使細(xì)胞得以生計(jì)、成長和繁衍,這一進(jìn)程稱原代培育。
但實(shí)際上,通常把第依代至第十代以內(nèi)的培育細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培育。
傳代培育(subculture):細(xì)胞在培育器皿中成長必定時(shí)刻后,被分開接種到新的培育器皿中。
當(dāng)原代培育成功今后,跟著培育時(shí)刻的延長和細(xì)胞不斷割裂,一則細(xì)胞之間互相觸摸而產(chǎn)生觸摸性按捺,成長速度減慢甚至中止;另一方面也會(huì)因營養(yǎng)物不足和代謝物堆集而不利于成長或產(chǎn)生中毒。此時(shí)就需要將培育物分割成小的部分,重新接種到別的的培育器皿(瓶)內(nèi),再進(jìn)行培育。
對(duì)單層培育而言,80%集合或剛集合的細(xì)胞是較理想的傳代階段。
四、體外培育細(xì)胞的方法
集體培育(mass culture),將含有必定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培育瓶中,讓細(xì)胞貼壁成長,集合(confluence)后構(gòu)成均勻的單細(xì)胞層;
克隆培育(clonal culture),將高度稀釋的游離細(xì)胞懸液加入培育瓶中,各個(gè)細(xì)胞貼壁后,互相間隔較遠(yuǎn),經(jīng)過成長增殖每一個(gè)細(xì)胞構(gòu)成一個(gè)細(xì)胞集落,稱為克?。╟lone)。一個(gè)細(xì)胞克隆中的所有細(xì)胞均來源于同一個(gè)祖先細(xì)胞。