ELISA試劑盒：自然殺傷細胞或 NK 細胞是一組*的淋巴細胞，具有先天的細胞毒性和免疫調(diào)節(jié)能力。這些大顆粒淋巴細胞占人體循環(huán)淋巴細胞的 5-20%，也存在于各種外周組織中。NK 細胞通過自主靶向外來、感染或癌細胞并釋放直接觸發(fā)細胞裂解的細胞毒性顆粒來直接促進免疫。NK 細胞還通過產(chǎn)生炎性細胞因子（如干擾素γ（IFNG）和腫瘤壞死因子α（TNF））間接影響免疫反應(yīng)。NK 細胞在免疫中發(fā)揮著核心和多樣化的作用，這證明了對這種細胞類型在許多研究領(lǐng)域的極大興趣，包括癌癥生物學和免疫治療。近的研究通過使用各種表型標記拓寬了我們對人類 NK 細胞群的復雜性和異質(zhì)性的理解。在這里，我們概述了用于識別各種子集的常見 NK 細胞蛋白質(zhì)標記。
對于科學家來說，定義 NK 細胞譜系并不是一項簡單的任務(wù)，部分原因是沒有僅針對 NK 細胞的已知標記。它們傳統(tǒng)上被定義為產(chǎn)生 IFNG 的細胞毒性淋巴細胞，它既不是 T 細胞也不是 B 細胞。因此，在流式細胞術(shù)中通常通過首先排除其他淋巴細胞標志物（如 CD3 T 細胞標志物）來識別 NK 細胞。分選后，兩種標記物已成為標準 NK 細胞標記物，CD56（神經(jīng)細胞粘附分子-1，NCAM1）和 CD16（低親和力 Fc γ 受體 3A、FCGR3A、FcγRIII）。這兩種表面蛋白的差異表達定義了常規(guī) NK 細胞的兩個主要亞群，CD56亮CD16 lo/- 和 CD56暗CD16 +，經(jīng)常簡化為CD56明亮更多的 NK 細胞亞群可以用下面列出的其他標記進一步描述。 和 CD56 dim，分別。間外周血循環(huán)細胞， CD56明亮的 是較不豐富的，估計僅包括 5 - 10％的人口。 CD56 dim 代表超過 90% 的 NK 細胞。然而， CD56亮 已經(jīng)注意到在某些組織中，包括次級淋巴組織豐富。
NK細胞發(fā)育的標志物
NK 細胞從骨髓中的常見淋巴祖細胞 (CLP) 發(fā)育而來。在這里，它們經(jīng)歷了不同的發(fā)育階段，包括 NK 細胞前體，以及未成熟和成熟的 NK 細胞。近的研究結(jié)果表明，發(fā)育也可以發(fā)生在次級淋巴組織中，例如淋巴結(jié)和脾臟。在此期間，細胞在 MHC-I 識別方面受到教育，以避免靶向健康的正常細胞。
早的 NK 細胞發(fā)育標志物之一是 IL2RB (CD122)，它在 CD34+ CLP 進入 NK 細胞命運時表達。NK 細胞前體的亞群可以通過 CD34、KIT、KLRB1、CD244 和 IL-15R 等基因的差異表達來識別。對于未成熟的 NK 細胞，已經(jīng)報道了 KLRK1、NCR1、NCR2、NCR3 和 KLRB1 的表達。到達光譜成熟末端的 NK 細胞可以通過它們的 KLRD1、ITGB2、KIR 受體、PRF1、IFNG、CD56 和 CD16 的表達來區(qū)分。
來自不同供應(yīng)商的標記抗體搜索
CD56亮 子集被認為是 NK 細胞成熟的早期階段。該子集具有更高的增殖能力，并與許多關(guān)鍵蛋白的顯著表達相關(guān)，包括 CCR7、CSF2、CXCR3、IL2RB、KLRC1 和 SELL。據(jù)報道，它還表達更高水平的 IFNG。CD56 的下調(diào)產(chǎn)生 CD56暗淡 NK 細胞亞群，與 CD16 的表達一致。該子集以其細胞毒活性而聞名，并且與殺傷性 Ig 樣受體 (KIR) 的表達有關(guān)，KIR 是一個跨膜糖蛋白家族，包含多個基因。與該子集相關(guān)的其他基因包括 CX3CR1、CXCR1、ITGB2、KLGR1 和 PRF1。
組織駐留NK細胞標志物
與血液中循環(huán)的常規(guī) NK (cNK) 細胞相比，組織駐留 NK 細胞 (trNK) 存在于許多組織中，包括淋巴結(jié)、胸腺、肝臟、肺、子宮和小腸。一般而言，據(jù)報道，trNK 細胞的細胞毒性較低，同時保留了產(chǎn)生細胞因子的能力。盡管與傳統(tǒng)組相比，對它們的具體功能了解較少，但 trNK 可以發(fā)揮不同的作用，因為研究發(fā)現(xiàn)細胞因子和 KIR 的表達譜不同。
近的研究表明，trNK 細胞包含具有不同免疫表型特征的特化、異質(zhì)群體。例如，淋巴結(jié)和扁桃體中的人類 trNK 細胞顯示 ICAM1 的高表達。在子宮中，trNK 細胞富含 KIR，并表達 NCR2 和 NCR3 的不同剪接變體。已發(fā)現(xiàn)肺 trNK 細胞表達不同水平的 ITGA1、CD69 和 CD16。胸腺 trNK 細胞與 CD56 和 IL7R 的表達有關(guān)。肝 trNK 細胞顯著表達 KLRC1 和 NCR1。在整個組織中，轉(zhuǎn)錄因子的譜也各不相同，例如 EOMES 和 TBX21。我們對 NK 細胞在各種組織中的作用的了解仍處于早期階段，新發(fā)現(xiàn)無疑將鞏固更多表征 trNK 亞群和功能的關(guān)鍵標志物。
適應(yīng)性NK細胞標志物
一個不太常見的亞群，稱為適應(yīng)性 NK 細胞，已被建議發(fā)展免疫記憶，成為特化的記憶樣細胞。對巨細胞病毒感染的小鼠和人類 NK 細胞的研究揭示了與常規(guī) NK 細胞在功能和表型特征方面的一些顯著差異。在小鼠中，在一個長壽 NK 細胞池中發(fā)現(xiàn)了標記物 Ly49H，這些細胞可以在病毒再次暴露后迅速增殖并增加細胞因子的產(chǎn)生。在人類中，已發(fā)現(xiàn)先前接觸過病毒的適應(yīng)性 NK 細胞表達激活的 MHC I 類結(jié)合受體 KLRC2。據(jù)報道，差異表達的蛋白質(zhì)包括 NCR1、B3GAT1、KLRC2 和 LILRB1。
NK細胞標記表
下表列出了表征各種 NK 細胞亞群的人和小鼠蛋白質(zhì)，如近的評論文獻所述。列出的大多數(shù)蛋白質(zhì)是在細胞表面表達的膜標記物，但也包括其他定義蛋白質(zhì)，包括轉(zhuǎn)錄因子和信號蛋白，如細胞因子。伴隨每個標記物的是相關(guān)抗體和 ELISA 試劑盒的鏈接，因為這些免疫檢測工具通常用于通過流式細胞術(shù)和免疫染色進行細胞表征研究。相關(guān)產(chǎn)品由各種商提供，可作為 NK 細胞免疫表型分析的有用參考。
基因 同義詞 標記類型 蛋白質(zhì)類型 本土化 大小 (kDa) 參考 抗體 ELISA 試劑盒
B3GAT1 CD57 昏暗，發(fā)展，適應(yīng)性 受體 細胞膜 38.3 1、2、3、4、6、8 CD57抗體 CD57 ELISA
CCR7 CD197 明亮，trNK 受體 細胞膜 42.8 1、2、3、4、7、8 CCR7抗體 CCR7 ELISA
CD16 FcγRIII、FCGR3A pan-NK，暗淡 受體 細胞膜 29 1、2、3、4、5、6、7、8 CD16抗體 CD16 ELISA
CD2 LFA-2 一般 受體 細胞膜 39.4 1,2,3 CD2抗體 CD2酶聯(lián)免疫吸附試驗
CD226 DNAM-1 一般 受體 細胞膜 38.6 2,3,4,7 CD226抗體 CD226 ELISA
CD244 2B4, SLAMF4 發(fā)展 受體 細胞膜 41.6 2,3,4,5 CD244 抗體 CD244 ELISA
CD27 發(fā)展, 老鼠 受體 細胞膜 2,5,7,8 CD27抗體 CD27 ELISA
CD3* T細胞 受體 細胞膜 1、4、5、6、8 CD3抗體 CD3酶聯(lián)免疫吸附試驗
CD300A IRp60 一般 受體 細胞膜 33.2 2,3 CD300A 抗體 CD300A ELISA
CD34 發(fā)展 粘附分子 細胞膜 40.7 1、2、3、4、5 CD34 抗體 CD34 ELISA
CD58 LFA-3 一般 受體 細胞膜 28.1 1,2 CD58抗體 CD58 ELISA
CD59 一般 受體 細胞膜 14.2 1,3 CD59抗體 CD59 ELISA
CD69 核糖體 受體 細胞膜 22.6 4、5、6、7 CD69抗體 CD69 ELISA
腦脊液2 轉(zhuǎn)基因腦脊液 光明，發(fā)展 細胞因子 分泌的 16.3 1,5,6,7 CSF2抗體 CSF2 ELISA
CX3CR1 CX3CR2 昏暗，發(fā)展 受體 細胞膜 40.4 1,2,4,6,8 CX3CR1 抗體 CX3CR1 ELISA
CXCR1 CD128 暗淡 受體 細胞膜 39.8 1、2、3、4、8 CXCR1 抗體 CXCR1 ELISA
CXCR3 CD183 明亮的 受體 細胞膜 40.7 1,4,8 CXCR3 抗體 CXCR3 ELISA
CXCR4 一般 受體 細胞膜 39.7 4,8 CXCR4 抗體 CXCR4 ELISA
歐米茄 TBR2 一般，trNK 轉(zhuǎn)錄因子 核 72.7 3、4、5、6、8 EOMES抗體 EOMES ELISA
廣州地鐵 一般 蛋白酶 分泌的 27.7 4,5,6,7,8 GZMB 抗體 GZMB ELISA
ICAM1 CD54 核糖體 受體 細胞膜 57.8 1,4 ICAM1抗體 ICAM1 ELISA
干擾素 干擾素γ 明亮的 細胞因子 分泌的 19.3 1、2、3、4、5、6、7 干擾素抗體 干擾素酶聯(lián)免疫吸附試驗
IL-15R* 一般，發(fā)展 受體 細胞膜 1、3、4、5、7、8 IL15RA 抗體 IL15RA ELISA
IL1R1 IL-1R 發(fā)展 受體 細胞膜 65.4 1,4 IL1R1 抗體 IL1R1 ELISA
IL22 發(fā)展 細胞因子 分泌的 20 2,5,7 IL22 抗體 IL22 ELISA
IL2RB CD122 光明，發(fā)展 受體 細胞膜 61.1 1、2、3、4、5 CD122抗體 CD122 ELISA
IL7R CD127、IL7RA 明亮，trNK，發(fā)展 受體 細胞膜 51.6 2,4,5,6,7,8 IL7R 抗體 IL7R ELISA
ITGA1 CD49a 核糖體 受體 細胞膜 130.8 6,7 ITGA1抗體 ITGA1 ELISA
伊加2 CD49b 發(fā)展, 老鼠 受體 細胞膜 5,6,7 Itga2抗體 Itga2 ELISA
意大利加爾 CD11A、LFA-1 一般 受體 細胞膜 91.4 1,2 CD11a 抗體 CD11a ELISA
ITGAM CD11b 發(fā)展, 老鼠 受體 細胞膜 127.5 5,7,8 ITGAM抗體 酶聯(lián)免疫吸附試驗
ITGB2 CD18、LFA-1 暗淡 受體 細胞膜 84.8 1,2 ITGB2抗體 ITGB2 ELISA
基爾* 昏暗，trNK 受體 細胞膜 1、2、3、4、5、6、7、8 KIR抗體 酶聯(lián)免疫吸附試驗
KIR2DL1 p58.1 一般 受體 細胞膜 38.5 2,3 KIR2DL1 抗體 KIR2DL1 ELISA
KIR2DL2 p58.2 一般 受體 細胞膜 38.5 2,3 KIR2DL2 抗體 KIR2DL2 ELISA
成套工具 CD117 光明，發(fā)展 受體 細胞膜 109.8 1,2,4,7 試劑盒抗體 試劑盒ELISA
Klrb1c NK1.1 一般, 鼠標 受體 細胞膜 5,6 Klrb1c 抗體 Klrb1c ELISA
KLRC1 NKG2A 光明，發(fā)展 受體 細胞膜 26.3 1、2、3、4、5、6、8 NKG2A 抗體 NKG2A ELISA
KLRC2 NKG2C 昏暗，自適應(yīng) 受體 細胞膜 26.1 2,3,4,5,8 NKG2C 抗體 NKG2C ELISA
KLRD1 CD94 光明，發(fā)展 受體 細胞膜 20.5 1、2、3、4、7 CD94抗體 CD94 ELISA
KLRF1 NKp80 發(fā)展 受體 細胞膜 26.6 2,3,4,5 KLRF1 抗體 KLRF1 ELISA
KLRG1 昏暗，發(fā)展 受體 細胞膜 21.8 4,5 KLRG1 抗體 KLRG1 ELISA
KLRK1 NKG2D 發(fā)展 受體 細胞膜 25.3 1、2、3、4、5、7 NKG2D 抗體 NKG2D ELISA
LILRB1 CD85J、ILT2 一般，自適應(yīng) 受體 細胞膜 70.8 1、2、3、4 LILRB1 抗體 LILRB1 ELISA
克拉4 Ly49D 一般, 鼠標 受體 細胞膜 5,7 Klra4抗體 Klra4 ELISA
克拉8 Ly49H 自適應(yīng), 鼠標 受體 細胞膜 4,5,6 Klra8 抗體 Klra8 ELISA
NCAM1 CD56 泛NK 受體 細胞膜 94.6 1、2、3、4、5、6、7、8 CD56抗體 CD56 ELISA
NCR1 NKp46、CD335 明亮，trNK，發(fā)展 受體 細胞膜 34.5 2,3,4,5,6,7 NCR1抗體 NCR1 ELISA
NCR2 NKp44 trNK, 發(fā)展 受體 細胞膜 30.7 2,3,5,7 NKp44 抗體 NKp44 ELISA
NCR3 NKp30、CD337 trNK, 發(fā)展 受體 細胞膜 21.6 2,3,4,5,6,7 CD337抗體 CD337 ELISA
PRF1 穿孔素 暗淡 結(jié)合蛋白 分泌的 61.4 1、2、4、5、6、8 PRF1抗體 PRF1 ELISA
賣 CD62L，L-選擇素 明亮，trNK 受體 細胞膜 42.2 1、2、3、4、7、8 CD62L 抗體 CD62L ELISA
SIGLEC7 CD328 一般 受體 細胞膜 51.1 2,3 CD328 抗體 CD328 ELISA
SLAMF6 NTB-A 一般 受體 細胞膜 37.3 2,3,4 SLAMF6 抗體 SLAMF6 ELISA
SPN CD43 發(fā)展 受體 細胞膜 40.3 1,5 SPN抗體 酶聯(lián)免疫吸附試驗
TBX21 T-BET 一般，trNK 轉(zhuǎn)錄因子 核 58.3 3、4、5、8 TBX21 抗體 TBX21 ELISA
腫瘤壞死因子 TNF-α、TNFα 一般 細胞因子 細胞膜，分泌的 25.6 1、2、4、6、7 腫瘤壞死因子α抗體 腫瘤壞死因子αELISA
注意：有些蛋白質(zhì)是由幾個不同基因組成的蛋白質(zhì)同種型或多亞基蛋白質(zhì)復合物。從 UniProt.org 獲得的關(guān)于蛋白質(zhì)類型、定位和大小 (kDa) 的信息（僅適用于人類基因）。
NK 細胞 是一類 具有 先天 毒性 和免疫調(diào)節(jié) 能力 的* 淋巴細胞 群。 它們 占人體 循環(huán) 淋巴細胞 的5-20 %，而且 還存在 于多種 外周 組織 中。 NK 細胞 通過 自主 的靶向 性目標 、感染 或癌細胞 ，釋放 引起 細胞分裂 的細胞毒 顆粒 ，從而 直接 促進 免疫 。 NK 細胞 也通過 產(chǎn)生 炎癥因子(如干擾素 γ(IFNG)和腫瘤 壞死 因子 α(TNF ))間接 影響 免疫反應(yīng)。 NK 細胞 在免疫過程中扮演著 核心 而多樣 的角色 ，這也證明 了NK 細胞 在腫瘤 生物學 和免疫治療 等諸多 研究領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用 。 近來 的研究 擴大 了我們 對NK 細胞 群復雜性 和異質(zhì)性 的認識 ，利用 各種 表型 標記 。 本文 介紹 了常見 的NK 細胞 蛋白 標記 ，用于 識別 不同 子集 。 對科學家 而言 ，定義 NK 細胞 譜系 并非 一個 簡單 的任務(wù) ，部分 原因 是因為 沒有 已知 的NK 細胞 標記 。 他們 通常 被定義 為細胞毒性淋巴細胞 ，能產(chǎn)生 IFNG，而非 T或B細胞 。 所以 ，流式細胞術(shù)通常 通過 先排除 其他 淋巴細胞 標記 物(例如 CD3T細胞 標記 )來識別 NK 細胞 。 經(jīng)分離 ，兩種 標記 物均成為 NK 細胞 的標準 標記 物，CD56(神經(jīng)細胞 粘附分子 1,NCAM1)和CD16(低親和 Fc γ3A,FCGR3A,Fc γRIII)。 在正常 NK 細胞 中，CD56亮CD16lo/-和CD56暗CD16+，常簡化 為CD56，更多 的NK 細胞 亞群 可用 下面 列出 的其他 標記 進一步 描述 。 與CD56dim分別 。 CD56呈亮的間外周血 循環(huán) 細胞 ，估計 只包含 5-10 %的人口 。 CD56dim代表 90 %以上 的NK 細胞 。 但是 ，CD56光在一些 組織 中已發(fā)現(xiàn) 豐富 ，包括 次級 淋巴組織。 NK 細胞 發(fā)育 的標志 。
NK 細胞 是由骨髓 中常見 的淋巴 祖細胞 (CLP )發(fā)育 而成。 這些 細胞 經(jīng)歷了不同 的發(fā)育階段 ，包括 NK 細胞 前體細胞 和未成熟 NK 細胞 。 近來 的研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)展 也可能 發(fā)生 在次級 淋巴組織，如淋巴結(jié) 和脾臟 。 這一時期 ，MHC -I的識別 教育 細胞 避免 了針對 正常 細胞 的目標 。 IL2RB(CD122)(CD34 +CLP 進入 NK 細胞 命運 )是NK 細胞 早期 的標記 物。
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