一、每種試劑都有其*反應(yīng)模式,其中溫度和溫育時間控制是重要因素。
因孵育溫度高,反應(yīng)時間長,會造成整板本底高,陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,ELISA試劑盒反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋。
作為記錄測定結(jié)果的儀器,酶標(biāo)儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標(biāo)儀應(yīng)定期進(jìn)行保養(yǎng),對濾光片要定期校正;其次酶標(biāo)儀波長設(shè)置要正確,使用雙波長,一個檢測波長,一個參比波長,以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標(biāo)儀讀數(shù)時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標(biāo)儀性能有所不同,使用中應(yīng)詳細(xì)閱讀說明書。
二、在ELISA試劑盒中正確的洗滌是保證得到可重復(fù)結(jié)果的關(guān)健一步,應(yīng)引起操作者重視。
無論是手工操作還是機(jī)器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關(guān),ELISA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
綜上所述,ELISA試劑盒我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至zui低限底,從而提高檢測的特異性,并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
在基因治療中,造血干細(xì)胞因?yàn)榫哂凶晕腋录胺只癁楦鞣N細(xì)胞系的能力而成為一種很有吸引力的靶細(xì)胞。ELISA試劑盒近年來,將外源目的基因?qū)朐煅杉?xì)胞,以糾正或補(bǔ)償基因缺陷和異常引起的疾病,特別是血液疾病如腺苷脫氨酶缺陷病、血友病、地中海貧血癥及鐮狀細(xì)胞貧血癥中已取得重要的進(jìn)展。
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